傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

HL-7702人肝細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CL-0448SW 1990(人胰腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 兔p物質(zhì)(SP)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Guinea IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FREM2： 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FREM2抗體 HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 Human

NHEK.f single donor Pellet 正常人表皮角質(zhì)細(xì)胞團(tuán)塊(少年者) > 1 mio.cells 小鼠顆粒細(xì)胞MGC 兔p53(p53)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Guinea IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FRG1： 面肩肱型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥相關(guān)蛋白FRG1抗體 豚鼠源細(xì)胞

M1(小鼠白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 兔C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 Goat Anti-Guinea IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

QGY-7703(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 7721(7721肝癌細(xì)胞) 大鼠脫氫酶(XDH)ELISA試劑盒 RANTES/CCL5(Human regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted)  人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子 96T

Phospho-MARCKS (Ser162)： 0酸化蛋白激酶C底物Marcks抗體 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R

IL18BP Protein Human 重組人 IL18BPa 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) 大鼠脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒 P-Selectin(Human P-Selectin/CD62P/GMP140)  人P選擇素 96T

Met (c Met)： 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體抗體 PGK1 Others Mouse 小鼠 PGK1 / PGKA 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)ELISA試劑盒 Lep IgG ISA Kit 大鼠鉤端IgG 96T

HL-7702人肝細(xì)胞Integrin alpha L： 整合素αL抗體 人晶狀體上皮細(xì)胞HLEpiC

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a) 人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her2)ELISA 試劑盒 MAGE-1 黑色素瘤相關(guān) 0.5mg

Interferon alpha： 干擾素α抗體 CHN1 Others Human 人 CHN1 / Chimerin 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)ELISA試劑盒 MAPKK1 (MAP kinase kinase 1) 原活化蛋白激酶激酶1抗原 0.5mg

Phospho-INPPL1(Ser576)： 0酸化肌醇聚0酸鹽0酸酶樣蛋白1抗體 長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞;4179 病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞，PT-67細(xì)胞 SMMC-7721(肝癌細(xì)胞)